Calcein Deep Red AM 鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

Calcein, AM 鈣黃綠素AM；Calcein Deep Red 鈣黃綠素深紅色；Cy5； 活細(xì)胞染色；Fluorescein diacetate (FDA)；Propidium Iodide（PI）碘化丙啶；

產(chǎn)品信息                                                                                    

【溫馨提示】：見(jiàn)我司（懋康生物）整理的鈣黃綠素（Calcein）系列產(chǎn)品專(zhuān)題，尋找最合適波長(zhǎng)的鈣黃綠素活細(xì)胞探針。

產(chǎn)品描述

Calcein, AM，中文名鈣黃綠素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一種具細(xì)胞膜滲透性zui受huan迎的活細(xì)胞熒光染料，用來(lái)標(biāo)記和監(jiān)測(cè)活細(xì)胞功能，呈綠色熒光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM單一顏色使其不能將其用在多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，比如，其無(wú)法和GFP轉(zhuǎn)染細(xì)胞聯(lián)合使用，因光譜一致。為了解決這一應(yīng)用缺陷，我司特別開(kāi)發(fā)出Calcein Red（貨號(hào)：MX3013），Calcein Deep Red（貨號(hào)：MX3016）這些衍生物，能夠聯(lián)合GFP或FITC等熒光素實(shí)現(xiàn)對(duì)活細(xì)胞的多重標(biāo)記和功能分析。

我司（懋康生物）提供的鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯（Calcein Deep Red AM）自身無(wú)熒光，具有細(xì)胞膜滲透性。能夠輕易進(jìn)入活細(xì)胞，被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解生成鈣黃綠素深紅（Calcein Deep Red），產(chǎn)生強(qiáng)烈的深紅色熒光（Ex/Em=643/663nm），用標(biāo)準(zhǔn)的Cy5濾片設(shè)置檢測(cè)。

產(chǎn)品特性

1）  同義名：Calcein Deep Red AM；Calcein Deep Red AM Ester;鈣黃綠素乙酰氧基甲酯（深紅色），鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯；

2）  分子量：~600

3）  純度：≥95%（HPLC）

4）  Ex/Em：643/663nm

5）  溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

應(yīng)用實(shí)例

Fig 1.HeLa細(xì)胞（活細(xì)胞+固定細(xì)胞）經(jīng)Calcein Deep Red AM（# MX3016）染色的圖片。

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃干燥保存，避免強(qiáng)光直射，有效期一年。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2. 本品從冰箱取出后請(qǐng)?jiān)诟稍锏沫h(huán)境放至室溫后再開(kāi)封。由于試劑微量，開(kāi)封前請(qǐng)將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3. 本品對(duì)濕度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。儲(chǔ)存液需要分裝避光凍存，且必須緊緊密封蓋子，干燥保存。工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1、儲(chǔ)存液制備

儲(chǔ)存液配制范圍可為2～5 mM，具體根據(jù)工作濃度來(lái)決定，建議提前配制成1000×儲(chǔ)存液。若使用的工作液為5μM，那么可配制5mM的儲(chǔ)存液，即往1mgCalcein Deep RedAM（Mw ~600）內(nèi)加入333μl細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的DMSO（貨號(hào)：MS4601A-100ML）即可。儲(chǔ)存液需要根據(jù)單次用量分裝，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此種情況下可穩(wěn)定保存數(shù)月。

2、染色工作液制備

于正式實(shí)驗(yàn)前，或溶解Calcein Deep RedAM粉末配制儲(chǔ)存液，或取一管已配制好的Calcein Deep RedAM儲(chǔ)存液并回至室溫使充分融化。用添加有2.5mM丙huang舒的HHBS（Hanks with 20mM Hepes buffer）或其他適當(dāng)?shù)木彌_液（pH 7.0）稀釋儲(chǔ)存液到5~10 µM工作濃度。

【注1：Calcein Deep Red染色工作液很不穩(wěn)定，需要使用前配制?！?/span>

【注2：許多細(xì)胞都含有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體。因此高度推薦染色工作液內(nèi)添加2.5mM丙huang舒（有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑），以防止熒光探針泄露到細(xì)胞外。】

3、染色步驟

以下是基于96孔板的Calcein Deep Red活細(xì)胞染色步驟，僅作參考。具體實(shí)驗(yàn)請(qǐng)根據(jù)自身要求做調(diào)整。

1. 細(xì)胞準(zhǔn)備：于黑框/透明底的96孔微孔板內(nèi)按照100~10,000個(gè)細(xì)胞/孔的量鋪板。設(shè)置空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基）?！咀⒁狻浚好糠N細(xì)胞系需要根據(jù)實(shí)際情況來(lái)確認(rèn)細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性誘導(dǎo)的細(xì)胞密度。增殖分析，細(xì)胞密度相對(duì)少些；毒性分析，起始細(xì)胞密度高些。建議96孔板的單孔體積為100 µL。

2. 藥物處理：加待測(cè)藥物到細(xì)胞內(nèi)處理適當(dāng)時(shí)間（比如24h，48h或96h）。設(shè)置空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相應(yīng)量的待測(cè)藥物?！咀⒁狻浚核幬锾砑忧翱刹挥们逑醇?xì)胞。然而，若是藥物是血清敏感性，那在添加藥物前需要吸掉生長(zhǎng)培養(yǎng)基和血清因子。替換之細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。

3. 吸掉培養(yǎng)基?！咀⒁猓禾结樇虞d前必須去除培養(yǎng)基】

4. 按照100 µL/孔（96孔板）的量加入Calcein Deep Red染色工作液。

5. 室溫或37℃避光孵育1h?！咀⒁?：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于細(xì)胞類(lèi)型和使用的細(xì)胞濃度。每個(gè)實(shí)驗(yàn)建議進(jìn)行孵育時(shí)間優(yōu)化?！俊咀⒁?：對(duì)于懸浮細(xì)胞，探針?lè)跤Y(jié)束后，于800rpm離心2min?！?/span>

6. 用含合適濾光片（Ex/Em= 643nm/663nm）的儀器進(jìn)行熒光檢測(cè)。【注意：如果熒光背景高，可在熒光信號(hào)檢測(cè)前用含2.5mM丙huang舒的HHBS緩沖液替換Calcein Deep Red染色工作液?！?/span>

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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