LysoSensor Green 綠色溶酶體熒光探針
簡(jiǎn)要描述:
LysoSensor Green 綠色溶酶體熒光探針,為滿足研究者研究活細(xì)胞內(nèi)溶酶體生成和功能的動(dòng)力學(xué)特征,特此開發(fā)Lysosensor探針,一種區(qū)分酸性細(xì)胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針,由于質(zhì)子化聚集在酸性細(xì)胞器上。這一質(zhì)子化也使得因弱堿性側(cè)鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放,促使熒光信號(hào)增強(qiáng)。
產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-21
LysoSensor Green DND-189 綠色溶酶體熒光探針
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
LysoSensor Green DND-189 | MX4321-50UL | 50µl | 583 |
產(chǎn)品描述
為滿足研究者研究活細(xì)胞內(nèi)溶酶體生成和功能的動(dòng)力學(xué)特征,特此開發(fā)Lysosensor探針,一種區(qū)分酸性細(xì)胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針,由于質(zhì)子化聚集在酸性細(xì)胞器上。這一質(zhì)子化也使得因弱堿性側(cè)鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放,促使熒光信號(hào)增強(qiáng)。因此,LysoSensor探針遇酸后熒光信號(hào)呈現(xiàn)pH依賴性的增強(qiáng)。
LysoSensor Green DND-189(綠色溶酶體探針)可用于測(cè)量溶酶體等酸性細(xì)胞器的 pH 值。LysoSensor 染料在酸性環(huán)境下的熒光會(huì)增強(qiáng)。LysoSensor™ Green DND-189 的 pKa 為大約5.2。
本品為DMSO儲(chǔ)存液,濃度為1mM。用于活細(xì)胞的溶酶體染色,建議工作濃度為≥1µM,需根據(jù)實(shí)際情況做優(yōu)化調(diào)整。
產(chǎn)品特征
1) 外觀:溶液
2) 濃度:1mM in DMSO
3) 亞細(xì)胞定位:溶酶體
4) 顏色:綠色
5) 檢測(cè)儀器:熒光顯微鏡
6) Abs(nm):443
7) Em(nm):505
8) 化學(xué)結(jié)構(gòu)式:
保存與運(yùn)輸方法
保存:≤-20oC避光干燥保存,收到貨至少12個(gè)月有效。
運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1) 整個(gè)染色過程中需注意避光。
2) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請(qǐng)將本品按單次用量分裝保存,≤-20°C避光干燥保存,盡量避免反復(fù)凍融。工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。
1. 工作液的配制
利用生長(zhǎng)培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM 儲(chǔ)存液稀釋至工作濃度,工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。對(duì)于 Lysosensor系列溶酶體探針,推薦工作液濃度≥1µM;
【注意】:
1)為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
2)若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育,會(huì)觀察到熒光信號(hào)的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。
2. 染色步驟(貼壁細(xì)胞)
1)將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上,加入合適培養(yǎng)基,使其爬片生長(zhǎng)。
2)待細(xì)胞生長(zhǎng)到合適密度,吸除培養(yǎng)液,加入適量 37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基(必須完*-全覆蓋住細(xì)胞),在適合特定細(xì)胞類型的生長(zhǎng)條件下孵育細(xì)胞30min-2h(具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定)。
3)利用不含探針的新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液,并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間,使得染料能聚集在溶酶體上。
3. 染色步驟(懸浮細(xì)胞)
1)離心沉淀細(xì)胞,吸除上清。
2)利用適量 37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,在適合特定細(xì)胞類型的生長(zhǎng)條件下孵育細(xì)胞30min-2h(具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定)。
3)離心,吸除染色液,加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
4)用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間,使得染料能聚集在溶酶體上。
【注意】:
另一種方法,懸浮細(xì)胞可能會(huì)粘附到經(jīng) BD Cell-Tak 處理的蓋玻片上,此時(shí),可用類似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。
附錄I 溶酶體探針總表
貨號(hào) | 名稱 | Abs (nm)[1] | Em(nm)[1] | pKa |
MX4320-50UL | LysoTracker Blue DND-22 藍(lán)色 | 373 | 422 | N/A |
MX4318-50UL | LysoTracker Green DND-26 綠色 | 504 | 511 | N/A |
MX4317-50UL | LysoTracker Red DND-99 紅色 | 577 | 590 | N/A |
MX4319-50UL | LysoTracker Deep Red 遠(yuǎn)紅 | 647 | 668 | N/A |
MX4316-50UL | LysoSensor Yellow/Blue DND-160 黃/藍(lán)色 | 329,384[2] | 440,540[2] | 4.2 |
MX4321-50UL | LysoSensor Green DND-189 綠色 | 443 | 505 | 5.2 |
[1]:在水溶性緩沖液或甲醇中測(cè)定的吸收和發(fā)射波長(zhǎng);在細(xì)胞環(huán)境內(nèi)數(shù)值可能會(huì)有些許差異。 [2]:雙吸收和發(fā)射波長(zhǎng),對(duì)pH敏感。 |
溶酶體系列探針常見問題
1. 如何選擇合適的溶酶體探針?
答:對(duì)于溶酶體定位實(shí)驗(yàn),請(qǐng)選擇Lysotracker系列探針,根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系,結(jié)合lysotracker系列探針的熒光特征,選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的熒光探針。Lysotracker Blue DND-22(MX4320-50UL)探針的光量子產(chǎn)率偏低,建議在非熒光選擇受限的情況下,推薦選擇其他幾款Lysotracker探針。對(duì)于酸性細(xì)胞器(比如溶酶體)的pH測(cè)定實(shí)驗(yàn),請(qǐng)選擇Lysosensor系列探針。
2. 溶酶體探針染色后是否能做固定?
3. 溶酶體探針是否能用于流式分析和熒光光度計(jì)分析?
4. 溶酶體探針LysoTracker Green DND-26(MX4318-50UL) 和LysoSensor Yellow/Blue DND-160
(MX4316-50UL)的建議孵育時(shí)間多少?
LysoSensor Green 綠色溶酶體熒光探針
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